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從人體血漿中提取酸性化合物的簡便方式

更新時間:2011-12-12      點擊次數(shù):5980

*,制藥領(lǐng)域中許多生物分析化合物都是堿性的,可以通過疏水性或陽離子交換吸附劑輕易地提取。不過,降脂他汀類和抗炎藥卻大多是酸性的。使用傳統(tǒng)的疏水性方法無法提取這些酸性化學(xué)物。因此,安捷倫開發(fā)出一種命名為Bond Elut Plexa PAX的新型聚合物強陰離子交換填料,專門用于簡化該提取過程。

圖 1. 使用安捷倫 Bond Elut Plexa PAX 從血漿中提取酸性藥物。放大 圖片

簡單通用的提取方法

我們開發(fā)了一種簡單通用的方法,使用安捷倫 Bond Elut Plexa PAX 提取酸性化合物。為了評估該方法的性能,我們測定了吸附劑床的分析物回收率、提取樣品響應(yīng)的線性以及加標(biāo)血漿樣品分析的準(zhǔn)確性和度。

由于方法的驗證過程非常耗時并且需要準(zhǔn)確度*的數(shù)據(jù),因此只有速度快、回收率好、重現(xiàn)性高的固相萃?。⊿PE)方法才能令人滿意。如果能對 SPE 過程進(jìn)行優(yōu)化且不損害數(shù)據(jù)完整性,便能夠簡化和縮短方法的驗證過程。Bond Elut Plexa 系列采用通用的方法,zui大程度縮減方法開發(fā)過程,同時還提高了分析靈敏度和重現(xiàn)性。

簡便的流程

我們使用安捷倫 Bond Elut Plexa PAX 96 孔板和2% NH4OH 、5% 甲酸進(jìn)行提取。圖 1 顯示了提取流程。將所有樣品蒸干,接著使用5 mM 80:20 的甲酸銨: CH3OH 水溶液定容至 100 µL。然后在安捷倫 325-MS LC/MS(采用 vESI 離子源)儀器上進(jìn)行液相色譜/質(zhì)譜分析。

可重現(xiàn)的回收率

我們通過測定分析物響應(yīng)并將其與加標(biāo)流動相標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行比較來計算回收率。由于提取效率低、離子抑制效應(yīng)或未洗脫導(dǎo)致的分析物損耗均會體現(xiàn)在回收率上。盡管一些回收率在 50% 至 60% 的范圍內(nèi),但響應(yīng)是線性的,因為方法的曲線線性良好,準(zhǔn)確性高。所有藥物的回收率均高于 50%,且重現(xiàn)性良好,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)低于 7%(表 1)。

藥物

回收率 %

% RSD (n=6)

阿托伐他汀

62

4.4

雙氯芬酸

52

3.7

速尿

96

6.1

酮基布洛芬

67

2.3

普伐他汀

95

3.4

   

表 1.安捷倫 Bond Elut Plexa PAX 提取酸性藥物的回收率。

 

圖 2.安捷倫 Bond Elut Plexa PAX 提取酸性藥物的回收線性良好。 放大 圖片

 

圖 3. 安捷倫 Bond Elut Plexa PAX 從人體血漿中提取的 50 ng/mL 樣品的色譜分析結(jié)果。放大 圖片

從 0.5 到 200 ng/mL 的線性良好(圖 2).選擇 50 ng/mL 的中點濃度測定校正曲線的準(zhǔn)確度 (表 2). zui后, 圖 3 顯示的樣品色譜結(jié)果展示了該方法有效性。

藥物

0.5 ng/mL

50 ng/mL

準(zhǔn)確度 (%)

% RSD (n=8)

準(zhǔn)確度 (%)

% RSD (n=8)

阿托伐他汀

90

11

106

11

雙氯芬酸

116

14

109

6

速尿

99

14

95

9

酮基布洛芬

104

13

108

4

普伐他汀

108

9

96

8

表 2. 校正曲線的準(zhǔn)確度。

Bond Elut Plexa PAX ——獲得較高回收率的簡便方法

上述結(jié)果表明,安捷倫 Bond Elut Plexa PAX 使用此簡便方法提取酸性化合物異常簡單。更好的是,該吸附劑對所有化合物都能提供較高的回收率,人體血漿中 0.5 至 200 ng/mL 的藥物樣品能夠獲得良好的線性。此外,校正曲線也呈線性,一階線性回歸的相關(guān)系數(shù)均大于 0.995。對于所有化合物而言,該方法準(zhǔn)確性高,重現(xiàn)性好,大多數(shù)結(jié)果都在實際值的 ±10% 以內(nèi),RSD 低于 15%。

全面了解安捷倫 Bond Elut解決方案。然后將安捷倫 Bond Elut Plexa PAX和固相萃取產(chǎn)品組合引入您的實驗室。

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